叶绿素分离及提取方法

　　1、膜分离技术。

　　用陶瓷膜微滤(MF)对浸提液进行精滤提纯，再用反渗透膜(R0)浓缩过滤液。这种工艺以膜分离技术为主体，替代了传统的酒精提纯和蒸发浓缩，工艺过程简单、色素溶液基本处于常温操作状态，既节约能源，又保证了色素产品的质量。

　　2、干燥法提取叶黄素。

　　研究出一种新型转筒式干燥机，用来干燥和捶击金盏花或者万寿菊花瓣，可以从中提取叶黄素。当捶击比率不同时，捶击效率就在70%～90%之间波动。叶黄素的多少决定于干燥时间长度。但在相同的干燥时间里，70℃下干燥提取的叶黄素含量比60℃下提取的叶黄素含量要少。

　　3、高效液相色谱分析法提取。

　　以二氯甲烷(22.5mL)+乙腈(9.5mL)+甲醇(67.5mL)+水(0.5mL)为流动相，流量为1.0mL/min。使用光度检测器(波长为450nm)检测分离后的类胡萝卜素和叶绿素。样品进样体积为20μL。在此条件下，叶黄素、叶绿素b、叶绿素a、番茄红素(lycopene)、α-胡萝卜素和β-胡萝卜素的保留时间分别为3.0、4.9、6.6、12.1、14.6和15.3min。取螺旋藻的培养液(通过测定光密度(560nm)得出培养液中螺旋藻干重于离心管中，离心后弃去溶液，加水洗涤后，加入2mL体积分数为90%丙酮水溶液，置于超声波发生器水浴上，使螺旋藻破碎。离心后取上层提取液用高效液相色谱法测定叶黄素/玉米黄质、β-胡萝卜素及叶绿素a的含量，其最高含量分别为：1.65μg/mg，2.15μg/mg和21.4μg/mg。

　　4、改良的高效色谱分析法。

　　采用美国Waters公司的680型自动程序梯度控制器，501型高压液相泵，M-490型可编程序紫外可见光检测器，730型数据处理器，记录保留时间和峰面积，走纸速度为2cm/min。选择最佳的色谱分离条件是色谱分析中的关键，本方法选用两种流动相A液和B液，采用线性梯度洗脱分离色素组分。用改良的高效色谱分析法分析叶黄素循环组分，具有快速、准确、分离度好以及重复稳定等优点。

　　5、玉米黄浆水中提取玉米黄色素。

　　选用己烷质量分数高达74%～80%的抽提溶剂油，根据液一固萃取原理，通过液固二相存在浓度差时的分子扩散作用，利用泵循环施以外力时的对流扩散作用，达到色素浸出的目的。再通过真空浓缩精制获得液态色素产品，或者添加辅料获得固态色素产品。

　　6、大豆中叶黄素的解析。

　　在酸和碱性稻壳灰中大豆油色素(叶黄素)解析时，连续的异丙醇/己烷的洗涤，增加溶液极性可提高叶黄素的解析，表明竞争吸附很大程度上决定于溶液的极性。但是当加入2%异丙醇洗涤时，用多种提取法解析出来的叶黄素会减少。叶黄素吸附的量越多必然伴随着更多的叶黄素的解析。这说明酸性环境比碱性环境更有利于解析。

　　7、叶黄素产品生产工艺。

　　以万寿菊花中用正己烷萃取而得的叶黄素为例：

　　皂化时氢氧化钠水溶液w(NaOH)=0.17。

　　万寿菊(Marigold)是提炼叶黄素及类胡萝卜素的主要原料，其中黄色色素含量平均每公斤不低于12克，这种色素是无公害的天然色素。